产品简介:

乳腺癌类器官培养基是一款促进乳腺癌类器官体外形成和扩增的培养基。该产品为无菌的液体混合系统，含有维持目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。该培养基的独特配方可以提供一个合适的细胞所需营养环境，促进人乳腺癌类器官的体外生长和扩增。

使用说明:

1.实验前准备:
(1)提前将24孔细胞培养板置于37℃的培养箱中预热过夜。
(2)将15mL无菌离心管、1.5mLEP管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
(3)提前30min从4℃冰箱取出该乳腺癌类器官培养基平衡至室温。
(4)提前从-20℃冰箱取出所需体积的细胞外基质胶冰上融化。
(5)配置含1%BSA的DMEM培养基冰上预冷备用。

2. 乳腺癌类器官培养

（1）消化后的细胞悬液进行计数。

（2）按每孔1~2×104个细胞密度计算所需细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5 mL离心管中，离心，弃上清，将细胞沉淀置于冰上。

（3）按1：2体积比，将一份体积的含1%BSA的DMEM加入2份体积的细胞外基质胶（Corning#356231）中，轻轻混匀（全程冰上操作），然后在冰上将配好的基质胶混合液与细胞沉淀充分混匀。

（4）将细胞沉淀与基质胶的混合液按照35 μL/孔滴在已提前预热好的24孔板中央，使之形成圆顶状胶滴。缓慢将细胞培养板移至培养箱至少30 min。

（5）待基质胶完全凝固，沿24孔壁缓慢加入1 mL/孔预先恢复至室温的本类器官培养基，并将培养板置于37℃，5%CO2条件下静置培养。

（6）镜下观察类器官形成情况，每3~4天更换一次培养基。

3. 乳腺癌类器官的收集

（1）弃培养基，每孔加入1 mL预冷的无血清DMEM:F12培养基并用该培养基润洗枪头，反复吹打至圆顶状胶滴完全脱离板底，将孔内吹散后的类器官混合液收集至15 mL离心管中。重复操作一次。将两次洗脱下来的类器官混合液合并收集至同一离心管中，1500 rpm离心5 min，轻轻吸去上清和基质胶层，沉淀待用。

（2）沉淀加入3-5 mL类器官解离试剂（PRS-ODR），37℃，200 rpm水平摇床上解离10 min（具体解离时间根据类器官大小和数量决定，以肉眼可见颗粒明显减小一半为准，可中途取解离的类器官显微镜下观察，类器官解离至平均包含有5~10个细胞的细胞团块大小最佳）。

（3）解离结束后加入和解离试剂等体积的含10%FBS的DMEM稀释。1500 rpm离心3 min，弃上清，待用。

4. 乳腺癌类器官传代

（1）收集好的细胞沉淀（以无肉眼可见基质胶状沉淀为准）加入1~2 mL预冷的含1%BSA的DMEM培养基重悬，在4℃下，1500 rpm，离心5 min。

（2）小心吸弃上清，沉淀用乳腺癌类器官培养基重悬计数。

（3）按照步骤2（2）~（6）的操作，以大约1000个类器官/孔密度重新接种类器官，并继续扩大培养。

储藏和保质期：
2~8℃避光保存1个月内有效，-20℃避光保存1年内有效。

注意事项：

1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
3.本产品中不含血清，含有抗生素，如无特别需要，不用额外添加血清和其他抗生素，可直接使用。
4.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
5.请于保质期内使用本产品，超出保质期后，将无法达到理想的使用效果。
6.乳腺组织样本建议为肿瘤术中样本，且肿瘤细胞比例越高(至少>50%)，培养成功率越高，不推荐用于少量样本(如穿刺或循环肿瘤细胞)的培养。
7.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。