小鼠气管类器官培养基是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维持来自小鼠气管干细胞的小鼠气管类器官。气管的自我更新上皮细胞是由基底细胞的增殖驱动的。小鼠气管类器官包含基底细胞、纤毛细胞、分泌细胞和少量神经内分泌细胞，因此类器官显示了气道的所有特征。因此，上皮细胞在结构、细胞类型组成和自我更新动力学方面具有很大的应用前景，可用于气道稳态与疾病的研究。
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| E3D1805 | Evabio®小鼠气管类器官培养基 | 100ml |
| E3D1805 | Evabio®小鼠气管类器官培养基 | 500ml |
产品简介:
小鼠气管类器官培养基是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维持来自小鼠气管干细胞的小鼠气管类器官。气管的自我更新上皮细胞是由基底细胞的增殖驱动的。小鼠气管类器官包含基底细胞、纤毛细胞、分泌细胞和少量神经内分泌细胞，因此类器官显示了气道的所有特征。因此，上皮细胞在结构、细胞类型组成和自我更新动力学方面具有很大的应用前景，可用于气道稳态与疾病的研究。
使用说明:
小鼠气管类器官完全培养基的制备
使用无菌操作技术配制小鼠气管类器官完全培养基。以下是准备 10mL 完全培养基的示例，如所需量不同，可相应调整用量。
1.冰上解冻Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)和 Mouse Airway Organoid Supplement C (250x)。
注意： 解冻后，建议将 Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)和 Mouse Airway Organoid Supplement C (250x)分别分装后保存取用，避免反复冻融。
2.将200uL Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)，40uL Mouse Airway Organoid Supplement C (250x) 加至9.76mL Mouse Airway Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10mL 小鼠气管类器官完全培养基。
注意：配制后的小鼠气管类器官完全培养基可在 2-8°C 储存，建议在两周内使用。Mouse Airway Organoid SupplementB(50x)内含有细菌及真菌抗生素(50x)。
1、小鼠气管类器官培养
2、小鼠气管类器官的原代建立
1.在含有抗生素的预冷DPBS中收集小鼠原代气管组织。
2.用DPBS冲洗两次组织。
3.在细胞培养皿中使用外科剪刀或手术刀将组织切成1-3毫米的小碎片。
4.用10mL类器官消化液在15mL离心管中37°C消化组织碎片，孵育时间从30分钟到1小时不等。仔细监测消化过程，每5-10分钟摇一次离心管，或上下颠倒混匀。当大多数组织碎片能够通过1mL移液管尖端时，消化过程就完成了。
5.将FBS加入组织消化液中，最终浓度为2%，用100 μm细胞过滤筛过滤。
6.收集过滤后的细胞，在4℃下250g离心3分钟。如发现明显的红色颗粒，抽吸上清，用2mL红细胞裂解液重悬红细胞在室温下静置1分钟，然后在4℃下250g离心3分钟。
7.弃去上清液，将颗粒重悬于上皮类器官基础培养基，在4℃下250g离心3分钟，再次重复此步骤。
8.弃去上清液，将细胞悬液重悬于基质胶中。基质胶应该保存在冰上以防止固化，此步骤应尽快完成。基质的用量取决于基质的大小，推荐重悬密度为每10uL基质胶悬液包含大约10,000个细胞。
注意：基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。
9.将基质胶和组织细胞的混合悬液点入 24 孔板底部正中央，每孔 30uL 左右，避免悬液接触孔板侧壁。
注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。
10.将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育15-25分钟待基质胶凝固。
11.配制小鼠气管类器官完全培养基。
12.待基质胶完全凝固后，加入已配制好的小鼠气管类器官完全培养基，24孔板每孔 500uL。
13.将24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养，直到类器官需要进一步的实验。
3、类器官的传代培养
14.用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官，并将类器官和培养基的悬液转移至经 过润洗液润洗的1.5mL EP 管中。
15.用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器官悬浮液，使得类器官与基质胶分离。
16.250g 离心力室温离心 3min。
17.弃上清，使用类器官消化液或用机械破坏。对于使用类器官消化液的细胞解离，在类器官消化液中重悬类器官悬浮液，移液器反复上下吹打并置于37°C孵育，直至类器官解离。使用带滤芯移液头每2分钟反复上下吹吸8次，以帮助破坏类器官。密切监视消化过程使在类器官解离液中的孵育时间最短。如发生机械故障，在1.5 mL上皮类器官基础培养基中重悬类器官悬液。小心地用移液管吸取类器官悬浮液，反复上下30次，这将有助于消化。
警告:不要在类器官解离液中解离超过5分钟，因为这可能会导致较差的类器官的生长甚至破坏。根据经验，如果是小块细胞的混合物，可以观察到由10-50个细胞组成的细胞团，消化就完成了。
18.消化完成后，用1ml上皮类器官基础培养基进行一次冲洗，然后室温下250g离心3分钟。
19.弃上清，用适量的基质胶重悬类器官沉淀，重悬后置于冰上，重悬时间不超过30s 以避免基质胶过早凝固。
注意：基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。
20.将基质胶和类器官的混合悬液点入24 孔板底部正中央，避免悬液接触孔板侧壁，每孔 30uL 左右。
注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。
21.将接种完成后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育 15min 左右待基质胶凝固。
22.配制小鼠气管类器官完全培养基。
23.待基质胶完全凝固后，加入已配制好的小鼠气管类器官完全培养基，24孔板每孔 500uL。
24.将24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养，直到类器官需要进一步的实验。
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