产品简介:

原代乳腺上皮细胞条件重编程培养基是一种为促进乳腺原代上皮细胞体外生长而设计的完全培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有目的细胞生长所必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物以及生长因子等。该培养基产品是基于碳酸氢盐的缓冲体系，在5% CO2/95%空气的培养箱中平衡时，pH值约为7.4。该培养基的配方，可以提供一个合适的营养环境，选择性地促进体外人乳腺原代上皮细胞的生长，实现体外培养周期短、成本可控、操作便捷的目的。

使用说明:

1.使用前准备:
(1)y 射线辐射过的NIH-3T3细胞。
(2)15 mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
(3)提前30 min从4℃冰箱取出本培养基平衡至室温。

2. 乳腺原代上皮细胞的培养

人乳腺组织经消化酶消化后，经100微米筛网过滤后计数，接种在合适的培养器皿中，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞，原代细胞初次接种后2-3 天勿动（利于细胞贴壁），培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可换半液，镜下观察细胞未长满但NIH-3T3细胞已不足时，适量补充γ射线辐照后的NIH-3T3细胞（一般补加初始数目的一半）。

3. 乳腺原代上皮细胞的传代

镜下观察细胞形成克隆，且汇合度达80~90%时即可传代。培养箱中取出细胞，弃旧培养液，0.05%胰酶洗涤30秒后吸尽，再加入适量TrypLE™ Express酶(Gibco#12605010)，37℃孵育，10-20 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况；待消化至细胞变圆并开始脱落时用含10%胎牛血清的DMEM培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，300g，5 min离心；弃上清，以1-2 mL本细胞培养基产品重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板。之后，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞，在培养板/孔中补加乳腺原代上皮细胞培养基至所需体积，轻轻摇晃混匀，表面消毒后置培养箱，37 ℃ 、5 % CO2条件培养。其他步骤同上。

储藏和保质期：
2~8℃避光保存1个月内有效，-20℃避光保存1年内有效。

注意事项：

1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.本产品无需添加血清、抗生素等补充剂，可直接使用。
3.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将本品过夜放置于室温或较高的温度环境中。
4.请于保质期内使用本产品，超出保质期，应放弃使用。
5.原代细胞初次接种时会贴壁较慢和贴壁不牢，若无必要，尽量减少取出观察的次数，建议2-3天观察一次。
6.传代消化时切记不要消化过度，以免对细胞造成损伤，影响细胞状态。
7.接种细胞时应注意细胞密度，不可过稀或过密。
8.使用本产品时应注意无菌操作，避免污染。
9.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。