产品简介:

口腔癌条件重编程培养基是一种为促进口腔癌原代细胞体外生长而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。培养基基于碳酸氢盐的缓冲体系，在5% CO2/95%空气的培养箱中平衡时，pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个合适的平衡的营养环境，选择性地促进体外人口腔癌原代细胞的生长。

使用说明:

1.使用前准备:
(1)15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min。
(2)提前30min从4℃冰箱取出原代细胞培养基平至室温。
(3)y射线照射过的NIH-3T3细胞(40Gy辐照)。

2 口腔癌原代细胞培养

获取的人源口腔癌原代细胞，按照说明书中细胞数接种在合适的培养器皿中，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(添加滋养细胞数量详见说明书)，原代细胞初次接种后2-3 天勿动(利于细胞贴壁)，培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可进行半换液，镜下观察细胞未长满但NIH-3T3细胞已不足时，适量补充γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(一般补加初始数目的一半)。

3. 口腔癌原代细胞传代

镜下观察细胞形成克隆，且汇合度85~95%时即可传代；培养箱中取出细胞，弃旧培养液，0.05%胰酶洗涤5秒后吸尽，再加入适量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况；细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用原代细胞终止培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，1500 rpm，3 min；弃上清，以1~5 mL相对应的原代细胞培养基重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量详见说明书)，补加口腔癌培养基至所需体积，十字交叉混匀，培养容器75%表面消毒后置培养箱，37 ℃ 、5 % CO2条件培养。其他步骤同上。

储藏和保质期：
2~8C避光保存2个月内有效，-20C避光保存1年内有效。

注意事项：

1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
3.本产品中含有原代细胞专用抗生素，如无特别需要不用额外再添加双抗，可直接使用。
4.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
5.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
6.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。