SW480细胞总养不好？手把手教你避开90%研究者都会踩的坑！

人结肠癌细胞SW480

人结肠癌细胞SW480源自原位直肠腺癌，和SW620细胞源自同一病人一年后的淋巴结转移。CSAp和直肠抗体3阴性；角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。人结肠癌细胞SW480不表达细胞溶解酶，一种与肿瘤入侵相关的金属蛋白酶。

细胞特性

1） 来源：结肠

2） 形态：上皮细胞样  贴壁生长

3） 含量：>1x106 细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备L-15培养基（E2115）；10%优质胎牛血清，(Evacell ,E01010）；1%双抗，(Evacell ,E3102)。

2） 培养条件： 气相：空气，100%；

（该细胞不能通入CO₂ ,如果没有条件准备空气气相100%的培养箱，可以采用不透气密封盖的T25培养瓶来培养，培养过程中每天将细胞拿出培养箱换1-2次空气。）

温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：推荐使用无血清冻存液（E4111）或者90%血清（E01010），10%DMSO，现用现配。

1）复苏细胞：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 
1、贴壁细胞，传代参考如下：
①. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS（EvaCell，E2119）润洗细胞1-2次。
②. 加2ml 0.25%胰蛋白酶消化液（E31031）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
③. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 
④. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 
3）细胞冻存：

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心5分钟，去除上清，按冻存数量加入无血清冻存液（E4111）或者血清及DMSO，冻存比例为90%FBS(Evacell ,E01010）+10%DMSO。 

 储存：液氮储存

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

人结肠癌细胞SW480的常见问题和解决方法

1. 细胞培养中的污染问题

问题描述：在细胞培养过程中，细菌、真菌或支原体污染是常见的问题。这些污染不仅会影响实验结果，还可能导致细胞死亡。

解决方法：

确保所有使用的试剂和耗材都是无菌的。

在超净工作台中进行操作，并定期对工作台进行消毒。

定期检查细胞是否存在污染，可以使用显微镜观察细胞形态变化，或者通过特定的检测方法（如PCR检测支原体）。

2. 细胞生长缓慢或停滞

问题描述：SW480细胞可能由于营养不足、代谢废物积累或环境条件不适宜而导致生长缓慢或停滞。

解决方法：

确保培养基的新鲜度，定期更换培养基以去除代谢废物并补充营养。

检查培养箱的温度（通常为37°C）、无CO₂和其他环境参数是否符合要求。

调整细胞接种密度，避免密度过低或过高。

3. 细胞凋亡或死亡

问题描述：细胞可能会因为药物处理、物理损伤或其他原因而发生凋亡或死亡。

解决方法：

如果是药物处理导致的细胞凋亡，可以通过调整药物浓度或处理时间来减少细胞损伤。

避免频繁或剧烈的操作，如过度吹打细胞悬浮液。

使用适当的细胞保护剂或抗氧化剂。

4. 细胞冻存与复苏问题

问题描述：在冻存和复苏过程中，细胞可能会因为冰晶形成或温度变化过快而受损。

解决方法：

采用逐步降温的方法进行冻存，例如先将冷冻管置于4℃ 30分钟，然后移至-20℃ 30分钟，最后放入-80℃冰箱中保存至少16小时后再转入液氮长期保存。

复苏时应快速解冻，即将冷冻管直接放入37℃水浴中快速融化，随后立即离心去除冻存液并更换新鲜培养基。

5. 实验结果不稳定

问题描述：不同批次间实验结果可能存在差异，影响数据的可重复性。

解决方法：

确保每次实验所用的细胞处于相同的生长阶段（如对数生长期）。

标准化实验操作流程，包括细胞传代、处理和检测等步骤。

使用同一批次的试剂和耗材，尽量减少外界因素对实验的影响

6.SW480细胞的培养条件有哪些？

答：1.生长培养基：Leibovitz's L-15 [E2115]+10% FBS [E01010]+1% P/S [E3102]
培养条件：气相：空气，100%, 温度：37℃

2. 生长培养基:DMEM高糖 [E2102]+10% FBS [E01010]+1% P/S [E3102]
培养条件: 气相：空气，95%；CO₂，5% , 温度：37℃ 

注意:该细胞推荐使用Leibovitz's L-15培养基进行培养，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，会产生细胞毒性。

2.该细胞不建议更换为DMEM培养，圆形较多，效果不好.

      本实验数据及要点仅供参考