细胞空泡问题

1.细胞老化

这是因为原代培养时细胞处于终末分化状态，不会再分裂，如果培养时间过长细胞就会空泡化从而导致死亡。但传代细胞出现这种状况比较少见，如果出现，原因一般都是因为细胞传代次数过多，严重老化。

解决方法

原代细胞使用较低代次进行实验，传代细胞避免传代次数过高。

2.培养液错误配制

培养液配制错误、过期储存、储存不当、血清质量不合格等原因，引起培养液的渗透压与PH值发生改变。

解决方法

更换新鲜培养液调整到合适的PH值，再进行培养。

注意培养液的正确配制与存储方法。

使用质量好和渠道正规的胎牛血清，因为这样的血清营养丰富且外源刺激因子少，可以有效的避免出现这类问题。

3.细胞消化时操作不当

胰酶消化时间过长导致细胞状态受损，以及吹打时力气过大产生的大量气泡长期存在于培养液中也会导致细胞的空泡化。

解决方法

选用合适的胰酶浓度和适当的消化时间进行消化。

在操作时避免吹打太过用力出现太多气泡，如果出现了大量气泡，可将气泡去除后再培养。

4.及时更换培养基

细胞在培养时会进行代谢，如果不及时换液细胞会因为营养物质的不断消耗、细胞代谢产物的积累从而使细胞缺乏营养，导致饥饿诱导形成自噬，从而产生空泡化，这种空泡在光学显微镜下是看不到的，只有在电镜下才能观察到。

解决方法

及时换液，通常2-3天需换液

5. 污染

化学物质：培养细胞时引入了一些各种自然或人工化合物等化学物质，如弱碱胺类物质导致的溶酶体的空泡化；MIPP， 一种查尔酮相关的分子，可以诱导大量的胞质空泡，导致细胞出现相关巨泡式死亡的特征。

细菌、病毒：细菌和病毒的产物或者细菌病毒感染细胞后导致细胞状态变差也会引起细胞空泡化，而其机制也各不相同。