产品简介:

食管癌类器官培养基是一种为促进食管鳞癌类器官体外形成和扩增而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基的独特配方可以提供一个合适的食管鳞癌类器官扩增所需营养环境，选择性地促进体外人食管鳞癌类器官的生长。

使用说明:

1. 实验前准备:
(1)消化好的食管癌原代细胞悬液。
(2)15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30min。
(3)提前30 min从4℃冰箱取出食管癌类器官培养基平衡至室温，提前从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。

2. 食管癌类器官培养

将消化好的食管癌细胞悬液计数，按照1-2万细胞每孔计算所需的细胞数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5 mL离心管中，补齐预冷的DF12至所需体积，将预冷后的细胞悬液加入等体积的Matrigel基质胶(Corning)中轻轻混匀(全程冰上操作)，然后将细胞与基质胶的混合液按照40 μL/孔接种于24孔板。将接种好的培养板放入培养箱至少30 min，待Matrigel完全凝固，然后沿24孔壁每孔缓慢加入500 μL预先恢复至室温的类器官培养基，3天后镜下观察类器官形成情况，粒径大于50 μm即认为类器官已经形成，每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于50 μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。

3. 食管癌类器官收集

弃培养基，每孔加入500 μL预冷DF12，反复吹打至基质胶完全脱离板底，收集至15 mL离心管中，1500 rpm离心5 min，轻轻吸去上清和基质胶层，待用。

4. 食管癌类器官传代

收集的类器官，加入3-5 mL类器官解离试剂（PRS-ODR），37℃，200 rpm水平摇床振荡消化（具体时间根据类器官大小和数量决定，以肉眼可见颗粒明显减小一半为准，可中间取消化的类器官显微镜观察，类器官消化至包含有3~10个细胞的细胞团块最佳）；消化完全后采用等体积的含10% FBS的DMEM培养基终止消化。1500 rpm离心3 min，弃上清，使用清洗液重悬沉淀后1500 rpm再次离心3 min；加入预冷的胃癌类器官培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养。

储藏和保质期：
2~8℃避光保存2个月内有效，-20C℃避光保存1年内有效。

注意事项：

1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
3.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
4.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
5.样本需为食管鳞癌术中样本，且肿瘤细胞比例越高(至少>50%)，培养成功率越高，不推荐用于少量样本(如内镜或者循环肿瘤细胞)的培养。
6.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。