食管癌条件重编程培养基是一种为促进食管鳞癌原代细胞体外生长而设计的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基产品基于碳酸氢盐的缓冲体系，在5% CO2/95%空气的培养箱中平衡时，pH值为7.4。该培养基的配方可以提供一个合适的平衡营养环境，选择性地促进体外人食管鳞癌原代细胞的生长。

使用说明:

1.使用前准备:
(1)y 射线照射过的NIH-3T3细胞(40 Gy辐照)
(2)15mL无菌离心管、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。提前30min从4℃冰箱取出原代细胞培养基平衡至室温。

2. 食管癌原代细胞培养

初次分离的食管癌小样本细胞悬液一般无需计数，直接种入12孔板中;食管癌术中样本过70微米筛网后计数，按照说明书表1中细胞数接种在合适的培养器皿中，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(添加滋养细胞数量见说明书如表1和表2所示)，原代细胞初次接种后2-3 天勿动(利于细胞贴壁)，培养过程中若培养基颜色变黄但细胞未长满时可换半液，镜下观察细胞未长满但NIH-3T3细胞已不足时，适量补充γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(一般补加初始数目的一半)。

3. 食管癌原代细胞传代

镜下观察细胞形成克隆，且汇合度80~90%时即可传代；培养箱中取出细胞，弃旧培养液，0.25%胰酶洗涤30秒后吸尽，再加入适量0.05%胰酶，37℃孵育，5 min后拿出轻拍培养瓶/板侧面，显微镜下观察细胞消化情况；细胞消化至细胞变圆并开始脱落时用终止培养基终止消化，并将细胞转移至离心管中，1500 rpm离心3 min；弃上清，以1-2 mL相对应的原代细胞培养基重悬细胞，活细胞计数，将细胞悬液按适合的细胞密度接种于培养瓶/板，加入γ射线辐照后的NIH-3T3细胞(不同规格培养瓶/板底面积、接种原代细胞数量、添加滋养细胞数量见说明书表1所示)，补加原代细胞培养基至所需体积，轻轻摇晃混匀，表面消毒后置培养箱，37 ℃ 、5 % CO2条件培养。其他步骤同上。

储藏和保质期：
2~8℃避光保存2个月内有效，-20℃避光保存1年内有效。

注意事项：

1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.本产品中含有胎牛血清和原代细胞专用抗生素，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可直接使用。
3.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。
4.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
5.原代细胞初次接种时会贴壁较慢和贴壁不牢，若无必要，尽量减少取出观察的次数，建议2-3天一次。
6.传代消化时切记不要消化过度，对细胞造成损伤，影响细胞状态。
7.接种细胞时注意细胞密度，不可过稀或过密。
8样本需为食管鳞癌术中或内镜样本，且肿瘤细胞比例越高(至少>50%)，培养成功率越高，不推荐用于少量样本(如循环肿瘤细胞)的培养。
9.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
10.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。